Получение тромбоцитов

Способ получения тромбоцитов. Изобретение

Получение тромбоцитов

В.А. Лифановский

Патент РФ 2068265

Введение

Способ получения тромбоцитов относится к гематологии. Цель изобретения – экономия крови и повышение степени очистки тромбоцитов. Тромбоциты культивируются в синтетической питательной среде.

Способ включает операции: выделение тромбоцитов из крови дифференциальным центрифугированием, приготовление жидкой и твердой питательной сред, посев тромбоцитов в жидкую питательную среду, посев на твердую питательную среду, посев на жидкую питательную среду, выделение тромбоцитов из среды и их промывка солевыми растворами.

Культивирование производится при температуре 0 – 44°С в течение 1 – 45 суток при аэрации. Полученные тромбоциты и среда после культивирования в ней тромбоцитов могут быть использованы как сырье при производстве лекарственных препаратов.

Изобретение относится к медицине, точнее к гематологии и вопросу получения клеток крови и их заменителей.

Известен способ получения тромбоцитов, включающий последовательное центрифугирование индивидуальных доз крови с последующей отмывкой. При первом мягком центрифугировании крови осаждаются эритроциты и лейкоциты.

При втором, более жестком центрифугировании осаждаются тромбоциты. Полученные тромбоциты отмываются различными солевыми средами (О.К.Гаврилов, Г.И.Козинец, Н.Б.Черняк “Клетки костного мозга и периферической крови” //М.

, “Медицина”,1985 г., с.227 – 231).

Недостатком указанного способа получения тромбоцитов является то, что для его осуществления, для получения нужного количества тромбоцитов, требуется большое количество крови, которое может быть взято у нескольких доноров, которые должны быть подобраны по антигенам АВО и HLA, что сделать очень сложно (Хью Р.К.

Барбер “Иммунобиология для практических врачей”//М., “Медицина”, 1980г., с. 137-138). Очистка не обеспечивает освобождение тромбоцитов от примеси эритроцитов и лейкоцитов полностью, а также от веществ, преимущественно белковой природы, определенных плазмой крови, которые обволакивают тромбоциты толстым слоем снаружи (З.С.

Баркаган “Геморрагические заболевания и синдромы”//М., “Медицина”, 1989 г., с. 14-15).

Целью настоящего изобретения является устранение указанных недостатков, т.е. создание способа получения тромбоцитов, полностью свободных от факторов, определенных плазмой крови и других форменных элементов ее, имеющих наперед заданные характеристики, и экономия крови.

Метод

Указанная цель достигается тем, что тромбоциты, полученные из малого количества крови путем дифференциального центрифугирования, помещают в среду, содержащую определенный набор химических веществ, и выдерживают в ней при определенных физических и химических условиях, при соблюдении условий строгой стерильности, т.е. дополнительно производится культивирование тромбоцитов в питательной среде, что и определяет возможность их получения в большом количестве, при минимальной затрате крови. Полученные таким способом тромбоциты не несут на своей мембране факторы, определяемые кровью донора. Выделение тромбоцитов из среды производится фильтрованием или центрифугированием с одновременной отмывкой солевыми средами. Среда, применяемая культивирования тромбоцитов, имеет следующие компоненты в мг/л:

Хлористый кальций3 – 200
Хлористый калий5 – 10000
Хлористый цинк0,01 – 100
Натрий фосфорнокислый двухзамещенный5 – 10000
Сульфат магния0,01 – 100
Гексацианоферрат /11/ калия0,01 – 200
DL лейцин3 – 2000
DL серин1,9 – 1500
DL триптофан0 – 500
L цистеин0 – 400
L гистидин1,7 – 1500
L аргинин0,6 – 500
L глютаминовая кислота1,1 – 1000
DL метионин0,5 – 500
L пролин0,8 – 1000
L аспарагин0,9 – 1000
DL лизин0 – 700
L глютамин0 – 500
Аминоуксусная кислота0,3 – 500
Сахароза100 -10000
Аденозинтрифосфат0 – 2000
Фолиевая кислота0,01 – 0,5
Тиамина бромид0,01 – 1
Пангамат кальция0,01 – 0,5
Пиридоксина гидрохлорид0,01 – 0,5
Цианокобаламин0,01 – 0,5
Аскорбиновая кислота0,01 – 1
Вода дистиллированнаяодин литр

Сахаразу можно заменить инозитом, дульцитом или маннитом, взяв их в том же количестве.

Культивирование

Культивирование тромбоцитов возможно при условии восполнения потребляемого ими кислорода. Поэтому культивирование можно проводить в тонком слое при доступе к поверхности свежего воздуха, или применив продувание питательной среды воздухом мелкими пузырями, что дополнительно предотвращает агрегацию тромбоцитов.

Добавив в среду агар-агар, можно получить твердую питательную среду, при этом можно не вводить углеводы, т.к. тромбоциты разжижают агар-агар.

Культивирование можно производить в стеклянной посуде, но нужно учесть, что примеси в стекле влияют на интенсивность роста, поэтому желательно использовать кварцевое стекло. Форма посуды может быть любой.

Культивирование производится в термостате при температуре 0 – 44°С в течение 1- 50 суток.

Первый этап развития культуры тромбоцитов, выделенных из крови, занимает длительное время, для его сокращения нужен редкий посев и отмывание тромбоцитов, например, 0,9% раствором хлористого натрия, перед посевом. Культура после последующих пересевов развивается быстрее. Срок развития может служить индикатором чистоты культуры.

Применяя известные методы пересева с жидкой питательной среды на твердую и обратно, можно добиться желаемой однородности и очистки тромбоцитов.

Экономию крови можно считать полной, т.к. она используется только для первоначального посева.

Конечным продуктом являются тромбоциты, образовавшиеся в результате некоторого деления исходных тромбоцитов, полученных из крови, при их росте и размножении на искусственной питательной среде. Поэтому способ дает возможность получить нужное количество тромбоцитов, свободных от плазмы крови и антигенов, определяемых ею.

Пример исполнения

Способ включает приготовление питательной среды, взятие крови, выделение и отмывку тромбоцитов, поспев, культивирование, выделение из среды культивирования и промывку.

Источник: //www.eurolab.ua/encyclopedia/565/6425/

Законодательная база Российской Федерации

Получение тромбоцитов

  • ПРИКАЗ Минздрава РФ от 25.11.2002 N 363 “ОБ УТВЕРЖДЕНИИ ИНСТРУКЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ”

9. Переливание тромбоцитных концентратов

Переливание тромбоцитного концентрата стало в последние годы обязательным условием программной терапии опухолей системы крови, апластической анемии, проведения трансплантации костного мозга.

Под “защитой” переливаний тромбоцитного концентрата проводятся курсы интенсивной химиотерапии с заранее планируемым периодом длительного агранулоцитоза и тромбоцитопении, выполняются полостные операции (лапаротомия, спленэктомия), невозможные ранее.

9.1. Характеристика тромбоцитного концентрата

Стандартный тромбоцитный концентрат, приготовленный из одной дозы консервированной крови объемом 450 мл, содержит не менее 55 х 1Е9 тромбоцитов.

Такое количество считается одной единицей тромбоцитного концентрата, переливание которой должно увеличивать количество тромбоцитов в циркуляции реципиента с площадью поверхности тела 1,8 м2 примерно на 5 – 10 х 1Е9/л при отсутствии у него признаков кровотечения.

Однако такая трансфузия не будет терапевтически эффективной при глубокой тромбоцитопении у больных с миелодепрессией, осложненной кровотечением. Установлено, что терапевтической дозой тромбоцитного концентрата является переливание не менее 50 – 70 х 1Е9 тромбоцитов на каждые 10 кг массы тела или 200 – 250 x 1Е9 на 1 м2 поверхности тела.

Следовательно, для взрослых реципиентов необходимое терапевтическое количество тромбоцитов должно составлять 300 – 500 x 1Е9.

Такое количество тромбоцитов может быть получено путем переливания одному реципиенту тромбоцитного концентрата, полученного от 6 – 10 доноров (тромбоцитный концентрат полидонорский).

Альтернативой этой методике является метод получения тромбоцитного концентрата от одного донора с помощью 4-кратного тромбоцитафереза с использованием рефрижераторных центрифуг и строенных пластикатных закрытых контейнеров. В этом случае можно получить от одного донора до 300 х 1Е9 тромбоцитов.

Использование метода Оптисистем (автоматические плазмоэкстракторы и особые контейнеры) позволяет получить пулированный (полидонорский) тромбоцитный концентрат более 300 х 1Е9 с минимальной примесью лейкоцитов.

Наибольшее количество тромбоцитов (800 – 900 x 1Е9) можно получить при проведении тромбоцитафереза у одного донора с помощью сепараторов клеток крови, работающих в автоматическом режиме в постоянном потоке крови.

В тромбоцитном концентрате, полученном любым из названных способов, всегда присутствует примесь эритроцитов и лейкоцитов, в связи с чем при появлении у реципиентов тяжелых трансфузионных реакций на введение тромбоцитного концентрата или рефрактерности необходимо удаление эритроцитов и особенно лейкоцитов.

С этой целью тромбоцитный концентрат монодонорский подвергают мягкому центрифугированию (178 g) в течение 3 мин. Такая методика позволяет “отмыть” почти 96% имевшихся в тромбоцитном концентрате лейкоцитов, но, к сожалению, при этом теряется около 20% тромбоцитов.

В настоящее время имеются специальные фильтры, удаляющие лейкоциты из концентрата тромбоцитов непосредственно во время переливания реципиенту, что существенно повышает эффективность заместительной терапии тромбоцитами.

9.2. Показания и противопоказания к переливанию тромбоцитного концентрата

Причинами тромбоцитопении и обусловленной ею кровоточивости могут быть:

– недостаточное образование тромбоцитов в костном мозге – амегакариоцитарная тромбоцитопения (лейкозы, гематосаркомы и другие онкологические заболевания с поражением костного мозга, апластическая анемия, миелодепрессия в результате лучевой или цитостатической терапии, острая лучевая болезнь, трансплантация костного мозга);

– повышенное потребление тромбоцитов (острый ДВС-синдром, массивная кровопотеря, дилюционная тромбоцитопения при синдроме массивных трансфузий, оперативные вмешательства с использованием аппарата искусственного кровообращения). Нередко при этих обстоятельствах снижается не только количество тромбоцитов, но и нарушается их функциональная способность, что увеличивает тяжесть кровоточивости;

– повышенное разрушение тромбоцитов (иммунные и иные тромбоцитолитические заболевания, при которых, как правило, количество мегакариоцитов в костном мозге может быть нормальным или даже повышенным).

Патологическая кровоточивость может наблюдаться и при качественной неполноценности тромбоцитов, т.е. при наследственных или приобретенных тромбоцитопатиях, при которых количество тромбоцитов, как правило, в пределах нормы или умеренно снижено в результате укорочения жизни дефектных клеток.

Уровень тромбоцитов 50 х 1Е9/л обычно является достаточным для гемостаза при условии их нормальной функциональной способности. В этих случаях время кровотечения находится в пределах нормы (2 – 8 мин. по Jvy), необходимости в переливании тромбоцитного концентрата нет даже при выполнении полостных операций.

При снижении уровня тромбоцитов до 20 x 1Е9/л в большинстве случаев наблюдаются клинические проявления спонтанного тромбоцитопенического геморрагического синдрома – петехиальные высыпания и синяковость на коже нижних конечностей, спонтанная кровоточивость на слизистых полости рта и носа.

Переливание тромбоцитного концентрата в таких состояниях необходимо, а при появлении мелкоточечных геморрагий на верхней половине туловища, кровоизлияний в конъюнктиву и на глазном дне, локальных кровотечений (желудочно – кишечный тракт, матка, почки, мочевой пузырь) переливание тромбоцитного концентрата является экстренной, жизненно показанной процедурой.

Переливание тромбоцитного концентрата при повышенном разрушении тромбоцитов иммунного генеза не показано, т.к. циркулирующие у реципиента антитромбоцитарные антитела быстро (в течение нескольких минут) лизируют донорские тромбоциты.

При тромбоцитопатиях переливание тромбоцитного концентрата показано лишь в ургентных ситуациях – при массивных кровотечениях, операциях, в родах. Переливание тромбоцитного концентрата с профилактической целью у этой категории больных не рекомендуется из-за возможного быстрого развития аллоиммунизации с последующей рефрактерностью к переливанию тромбоцитов в критических ситуациях.

Конкретные показания к назначению тромбоцитного концентрата устанавливаются лечащим врачом на основании анализа клинической картины и причин тромбоцитопении, степени ее выраженности и локализации кровотечения, объема и тяжести предстоящей операции.

9.3. Критерии эффективности переливаний тромбоцитного концентрата

Клиническими критериями эффективности переливания тромбоцитного концентрата являются прекращение спонтанной кровоточивости и отсутствие свежих геморрагий на коже и видимых слизистых.

Клинически наблюдаемый гемостаз является важнейшим критерием эффективности и адекватности дозы перелитых донорских тромбоцитов, хотя при этом зачастую не происходит рассчитанного и ожидаемого увеличения количества тромбоцитов в циркуляции.

Лабораторные признаки эффективности заместительной терапии переливания тромбоцитного концентрата заключаются в увеличении количества циркулирующих тромбоцитов в русле крови реципиента через час после трансфузии (при эффективном переливании их число достигает 50 – 60 x 1Е9/л).

Через 24 часа при положительном результате их количество должно превышать критический уровень 20 x 1Е9/л или, во всяком случае, быть выше исходного предтрансфузионного количества.

Нормализация или уменьшение времени кровотечения также может быть критерием эффективности переливаний тромбоцитного концентрата.

Другим критерием эффективности трансфузий тромбоцитного концентрата может быть время возвращения количества тромбоцитов у реципиента к исходному уровню – обычно через 1 – 2 дня. Этот показатель позволяет оценивать не только эффективность терапии тромбоцитами, но и прогнозировать частоту переливаний и их иммунологическую совместимость.

Реально никогда не наблюдается 100% ожидаемого прироста числа тромбоцитов.

На снижение посттрансфузионного уровня влияют наличие у реципиентов спленомегалии, инфекционных осложнений, сопровождающихся гипертермией, синдрома ДВС, массивного локального кровотечения (особенно желудочно – кишечного или маточного), аллоиммунизации с иммунологически обусловленной деструкцией донорских тромбоцитов, вызванной антителами к антигенам тромбоцитов и / или лейкоцитов.

В этих не столь редких клинических ситуациях потребность в переливании терапевтически эффективного количества тромбоцитов возрастает.

При спленомегалии количество переливаемых тромбоцитов должно быть увеличено по сравнению с обычным на 40 – 60%, при инфекционных осложнениях, в среднем, – на 20%, при выраженном ДВС-синдроме, массивной кровопотере, явлениях аллоиммунизации – на 60 – 80%. При этом необходимая терапевтическая доза может быть перелита в два приема, например, утром и вечером.

Оптимальным режимом переливания тромбоцитного концентрата является такой, при котором время длительности кровотечения находится в пределах нормы, а количество тромбоцитов в периферической крови поддерживается на уровне выше 40 x 1Е9/л.

9.4. Профилактическое переливание тромбоцитного концентрата

При профилактическом назначении переливаний тромбоцитного концентрата, т.е.

когда имеется относительно глубокая тромбоцитопения (20 – 30 х 1Е9/л) амегакариоцитарной природы без признаков спонтанной кровоточивости, трансфузиолог всегда обязан соотнести риск возможных геморрагических осложнений с риском ранней аллоиммунизации больных, особенно при использовании тромбоцитного концентрата полидонорского. Профилактические переливания тромбоцитного концентрата показаны при наличии сепсиса у больных на фоне агранулоцитоза и ДВС-синдрома. Показано переливание тромбоцитного концентрата у больных острыми лейкозами для профилактики геморрагий. Подобным больным целесообразно проводить предварительный подбор доноров с типированием по HLA-системе, т.к. именно HLA антигены 1-го класса, присутствующие на самих тромбоцитах, наиболее часто служат причиной сенсибилизации и рефрактерности, развивающихся при многократных переливаниях тромбоцитного концентрата.

В целом, профилактическое назначение переливаний тромбоцитного концентрата требует еще более строгого отношения, чем терапевтическое назначение заместительной трансфузии донорских тромбоцитов при минимальной кровоточивости.

9.5. Условия переливания тромбоцитного концентрата

Донор тромбоцитов подвергается такому же обязательному предтрансфузионному контролю, как и при донации цельной крови, эритроцитов или плазмы в соответствии с действующей нормативной документацией.

Кроме того, не допускается прием донорами тромбоцитов аспирина и других препаратов салициловой кислоты в течение трех дней, предшествующих тромбоцитаферезу, т.к. аспирин ингибирует агрегацию тромбоцитов.

Пара “донор – реципиент” при переливании тромбоцитного концентрата должна быть совместима по антигенам АВ0 и резус. Несовместимость по АВ0 снижает эффективность донорских тромбоцитов.

Однако в повседневной клинической практике, особенно при большом количестве реципиентов, нуждающихся в переливании тромбоцитного концентрата, и ограниченном количестве доноров, допустимо переливать тромбоциты 0(I) группы реципиентам других групп крови, не задерживая трансфузию в поисках совместимых тромбоцитного концентрата.

Непосредственно перед переливанием тромбоцитного концентрата врач тщательно проверяет маркировку контейнера, его герметичность, сверяет идентичность групп донора и реципиента.

Совместимость по системе резус также необходима, если же переливаются тромбоциты, разногруппные по резус – принадлежности, то возможные реакции могут быть предупреждены введением иммуноглобулина, содержащего анти-D антитела.

При многократных переливаниях тромбоцитного концентрата (иногда уже после 6 – 8 переливаний) у некоторых больных может наблюдаться рефрактерность (отсутствие как прироста тромбоцитов в крови, так и гемостатического эффекта), связанная с развитием у них состояния аллоиммунизации.

Аллоиммунизация вызывается сенсибилизацией реципиента аллоантигенами тромбоцитов донора (доноров) и характеризуется появлением у реципиента иммунных антитромбоцитарных и анти-HLA антител.

В этих случаях трансфузия тромбоцитного концентрата сопровождается температурной реакцией, ознобом, отсутствием прироста числа тромбоцитов в циркуляции и гемостатического эффекта.

Поэтому у реципиентов, которые заведомо будут нуждаться в длительных повторных переливаниях тромбоцитного концентрата (апластическая анемия, трансплантация костного мозга), лучше использовать тромбоцитный концентрат, полученный автоматическим аферезом от доноров – родственников или от донора костного мозга. С целью удаления примеси лейкоцитов, помимо дополнительного “мягкого” центрифугирования должны быть использованы специальные фильтры, позволяющие уменьшить количество лейкоцитов в тромбоцитом концентрате.

Тромбоцитный концентрат содержит также примесь стволовых клеток, поэтому для профилактики реакции “трансплантат против хозяина” у больных с иммунодепрессией, при трансплантации костного мозга тромбоцитный концентрат перед переливанием должен быть облучен в дозе 1500 рад.

В целом, при использовании тромбоцитного концентрата в обычной (неосложненной) практике рекомендуется следующая тактика: больные, не имеющие отягощенного трансфузионного анамнеза, получают переливания тромбоцитного концентрата, одноименных по эритроцитарным антигенам групп АВ0 и резус.

При появлении клинических и иммунологических данных о рефрактерности последующие трансфузии тромбоцитного концентрата требуют специального подбора пары “донор – реципиент” по тромбоцитарным антигенам и антигенам системы HLA, знания фенотипа тромбоцитов реципиента, проведения пробы на совместимость плазмы больного с тромбоцитами донора, переливания тромбоцитов через специальные лейкоцитарные фильтры.

  • ПРИКАЗ Минздрава РФ от 25.11.2002 N 363 “ОБ УТВЕРЖДЕНИИ ИНСТРУКЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ”

Источник: //zakonbase.ru/content/part/67155

Переливание тромоцитарной массы

Получение тромбоцитов

Онкологическая клиника в Москве ¦ ПЕРЕЛИВАНИЕ КРОВИ ОНКОБОЛЬНЫМ ¦ Переливание тромбоцитарной массы

Лечение переливанием крови

Переливание крови практикуется в медицине уже достаточно давно. В большинстве случаев эта процедура быстро улучшает состояние пациента и даже спасает ему жизнь.

Не существует синтетических аналогов цельной крови и ее компонентов, которые смогли бы замещать их функции. Несмотря на то, что в истории науки были попытки создать так называемую искусственную кровь, внедрения подобных технологий так и не произошло.

Кровь – чрезвычайно сложный комплекс клеток, белков, липидов, ростовых факторов и других составляющих и учесть это разнообразие в каком-либо одном заменителе не представляется возможным.

Тем не менее, цельную кровь переливают достаточно редко, поскольку чаще всего при конкретной патологии страдает один из ее компонентов, а в других нет необходимости. Не стоит забывать, что кровь – чрезвычайно богата различными антигенами, что повышает вероятность появления аллергической реакции в организме реципиента при переливании.

По этой причине в клинической практике используют одну из фракций крови

  • лейкоцитарную,
  • тромбоцитарную,
  • эритромассу,
  • плазму и др.

То есть берут те форменные элементы или белки, в которых организм пациента имеет потребность, при этом он избавляется от ненужной иммунизации антигенами других клеток крови, которые не входят в данную фракцию.

Гемотрансфузия в Европейской клинике

В Европейской клинике онкологии и хирургии переливание крови осуществляется постоянно из-за того, что здесь лечатся тяжелые раковые и соматические больные, для восстановления которых требуются гематологические компоненты.

Их используют как для спасения жизни людей, так и в паллиативных целях для улучшения качества жизни и предотвращения развития опасных осложнений.

Профессионализм врачей Европейской клиники позволяет в каждом случае подбирать наиболее эффективную схему лечения и добиваться максимальных результатов в проводимой терапии.

Получение тромбоцитарной массы

Тромбоцитарная масса, используемая в клинических целях в основном, содержит тромбоциты и некоторое количество примесей в виде эритроцитов и лейкоцитов.

Взвесь тромбоцитов получают путем мягкого центрифугирования плазмы крови. Она должна содержать не менее 50*109 тромбоцитов в одном флаконе.

Примесь клеток удаляется путем использования фильтров. Тем не менее могут присутствовать обломки форменных элементов.

Для лечения пациентов используют свежие тромбоциты, поэтому срок хранения полученной взвеси не превышает одной недели, после чего ее утилизируют, как биологические отходы.

Хранят взвесь при температуре 20ºС. Через три дня хранения тромбоциты начинают терять функциональную активность и их пригодность для замещения утрачивается.

Показание к применению тромбоцитарной массы

Тромбоциты являются осколками цитоплазмы крупных клеток мегакариоцитов. Последние производятся в костном мозге, как конченый продукт мегакариоцитарного ростка кроветворения.

Свойством тромбоцитов является участие в образовании тромба, которое запускается при высвобождении тканевого тромбопластина, содержащегося в стенке сосудов. При травме сосудистой стенки начинается процесс свертывания крови, сопровождающийся выпадением фибриновых нитей и скоплением тромбоцитов в месте повреждения.

Тромбоциты содержат на своей поверхности плазменные факторы свертывания, а гранулах, соответственно гранулоцитарные факторы. Вместе их обозначают, как тромбоцитарные факторы свертывания.

Свертывание крови является критичным для выживания и сохраняет постоянство внутренней среды организма через механизмы гемостаза. Признаком имеющихся проблем с тромбоцитами служить удлинение времени свертывания крови: в норме время свертывания крови по Сухареву (капиллярная кровь) составляет 3-5 минут.

Увеличение верхнего предела до 8 минут и выше может служить поводом для переливания тромбоцитарной массы.

Клинически это может выражаться в кровоточивости, появлении петехий, геморрагий, гематом, кровоизлияний в слизистую оболочку и под кожу.

Существует множество причин для подобных нарушений. При онкологических заболеваниях раковая интоксикация может пагубно сказываться на всех ростках кроветворения, включая мегакариоцитарный.

При этом содержание тромбоцитов в русле крови падает и появляется склонность к длительным кровотечениям. При лейкозах и лимфомах избыточное количество мутировавших клеток инфильтруют костный мозг, вытесняя кроветворение по другим клеточным линиям, что также приводит к угнетению гемостаза.

При кровопотерях, особенно повторяющихся, организм может терять тромбоциты вместе с кровью, что опять-таки способствует изменению свертывания.

Показанием к переливанию тромбоцитарной массы может быть повышенная деструкция тромбоцитов, обусловленная, например, гиперспленизмом или воздействием различных микробных агентов.

Известно, что ряд опасных вирусных инфекций сопровождаются геморрагиями и значительными кровопотерями. В то же время следует помнить, что при аутоиммунных тромбоцитопениях не переливают тромбоцитарную взвесь, поскольку это лишь усиливает аутоагрессию: таким пациентам назначают глюкокортикоиды, которые подавляют клоны лимфоцитов, продуцирующих антитела к тромбоцитам.

Очень часто приходится к прибегать к донорским тромбоцитам при развитии диссеминированному внутрисосудистого свертывания.

Это заболевание развивается после массивного освобождения тканевого тромбопластина и активного процесса тромбообразования внутри сосудов.

Результатом таких событий становится дефицит тромбоцитов и факторов свертывания крови, которых приходится замещать введением тромбоцитарной массы и плазмы крови (или криопреципитата плазмы).

Иногда причиной использования тромбоцитарной взвеси служит неполноценность тромбоцитов, например, вследствие генетических особенностей человека. Другим поводом служит наследственный дефицит мегакариоцитов в костном мозге.

Проведение переливания тромбоцитарной массы

Благодаря тому, что тромбоцитарная масса не содержит других форменных элементов, ее способность провоцировать антигенный конфликт снижена по сравнению с цельной кровью и другими ее фракциями.

Тем не менее, в обязательном порядке донорскую взвесь тромбоцитов тестируют по системе АВ0 и резус-фактору.

Также проводят биологическую пробу, которая предваряет введение основной массы взвеси и сигнализирует об иммунном конфликте, если таковой имеется.

Переливание тромбоцитов проходит достаточно быстро и занимает 30-40 минут.

Возможные осложнения переливания тромбоцитарной массы

В процессе него возможно возникновение пирогенной реакции за счет остатков лейкоцитов, а также присутствия фактора некроза опухоли и ИЛ-1-бетта, которые являются мощными пирогенами.

К другим осложнениям относят иммунный конфликт, особенно, если пациенту уже переливали тромбоциты данного донора раньше.

Иногда происходит передача бактериальной и вирусной инфекции, даже несмотря на то, что кровь донора тестируют на ВИЧ, возбудители гепатитов, сифилиса.

Тем не менее, есть много достаточно распространенных вирусов, которые могут инфицировать пациента впервые (итомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр и др.) и вызывать соответствующую клиническую симптоматику.

Несмотря на описанные риски, вероятность их реализации намного ниже, чем опасность основной патологии и при соблюдении всех мер предосторожности практически всегда удается получить хороший эффект от переливания тромбоцитарной массы.

+7(925)191-50-55 европейские протоколы лечения в Москве

ЗАПРОС в КЛИНИКУ

Источник: //www.rusmedserv.com/oncoclinic/BLOODTRANSFUSION/Transfusionplateletmass/

Эволюция получения тромбоцитного концентрата из ЛТС на СПК №2 «Сангвис»

Получение тромбоцитов

А.М. Орлов¹, М.В. Козлова¹, О.А. Серикова²

¹ГУЗ Свердловской области «Станция переливания крови № 2 «САНГВИС», г. Екатеринбург 

²ЗАО «Дельрус», г. Екатеринбург

Трансфузиология №3, 2013

Станция переливания крови № 2 «САНГВИС» обеспечивает ТК больницы города Екатеринбурга, а также городское гематологическое отделение (40 коек).

Последние годы происходит заметный рост потребления тромбоцитов [1]. В 2009 году нами выдано 1047, в 2010 году – 1308, в 2011 – 1543, а в 2012 году 1714 терапевтических доз1.

За последние 4 года отделением заготовки крови применялись различные способы получения КТ:

1. Методом автоматического афереза на аппарате «MCS+».

2. Из обогащенной тромбоцитами плазмы (ОТП).

3. Из ЛТС.

Способ получения тромбоцитов методом автоматического афереза обеспечивает высокое качество ТК, минимальное содержание лейкоцитов и эритроцитов. Допустимый срок хранения продукта составляет пять суток. Есть возможность последующей инактивации патогенов с использованием аппарата INTERCEPT, Cerus.

Автоматический аферез позволяет подбирать доноров по определенному фенотипу, восполнять дефицит по определенной группе крови, автоматизировать и стандартизировать процесс [4]. Данный метод получения тромбоцитов наиболее предпочтителен, однако является самым дорогостоящим.

С целью оптимизации затрат на получение ТК, наша СПК наряду с автоматическим аферезом применяет методы получения тромбоцитов из дозы консервированной крови. Способ выделения тромбоцитов из ОТП прост в исполнении и не требует дорогостоящих расходных материалов, однако получаемый ТК содержит значительную примесь лейкоцитов и эритроцитов (более 4х106).

На третьи сутки хранения при +22°С наблюдается снижение рН среды до 6,5. Высокая примесь эритроцитов исключает возможность инактивации данного ТК на аппарате INTERCEPT, Cerus. Образование микросгустков затрудняет последующую фильтрацию для удаления лейкоцитов.

Ввиду вышеперечисленных недостатков мы были вынуждены приступить к поиску альтернативных способов получения тромбоцитов. После обучения в ОПК (заведующая отделением С.А. Трофимова) на базе городской больницы № 31 (г. Санкт-Петербург), мы начали применять методику получения пулированного ТК из ЛТС.

Способ выделения тромбоцитов из ЛТС сложнее в исполнении, чем получение тромбоцитов из ОТП, однако позволяет оперативно выделить терапевтическую дозу ТК с низким содержанием лейкоцитов и эритроцитов, а также возможностью его дальнейшей инактивации [6]. С 2010 г. мы полностью отказались от метода получения ТК из ОТП, заменив его ТК, выделенным из ЛТС (рис. 1).

Материалы и методы На первом этапе внедрения метода мы применяли контейнеры полимерные счетверенные с двумя растворами консервантов СPD-SAGM, конфигурации «top and top» (с двумя портами в верхней части контейнера).

Центрифугирование дозы цельной крови осуществлялось в течение 12 минут при ускорении 4500 g. Разделение крови на эритроцитную взвесь, плазму и ЛТС (40–50 мл) осуществлялось механическими плазмоэкстракторами при визуальном контроле.

После получения результатов лабораторного обследования 5–6 одноимённых по группе крови и резус-фактору, ЛТС и плазма одного из доноров объединялись в пул.

Для пулирования ЛТС применялась специализированная система полимерных контейнеров с интегрированным фильтром для удаления лейкоцитов «Teruflex BP-Kit» либо «Autostop», а также устройство для стерильного соединения пластиковых трубок «TSCDII».

Центрифугирование пула ЛТС для выделения концентрата тромбоцитов производилось при ускорении 480 g в течение 6 минут. Полученный ТК экстрагировался через встроенный в систему фильтр в газопроницаемый контейнер, обеспечивающий хранение тромбоцитов в течение 5 суток.

тромбоцитов в ТК составляло от 210 х 109 до 350 х 109. Подсчет тромбоцитов, эритроцитов и лейкоцитов осуществлялся на анализаторе «МЕК-6400К».

Следующим этапом была заготовка крови в контейнеры полимерные с двумя растворами консервантов СPD-SAGM конфигурации «top and bottom» (с верхним и нижним выходами). Данная конфигурация контейнеров позволяет избежать потерь тромбоцитов в трубках и складках контейнеров, т.к. весь ЛТС остаётся в первичном контейнере.

Разделение крови на эритроцитную взвесь, плазму и ЛТС осуществлялось на автоматических фракционаторах компонентов крови «T-ACE II». тромбоцитов в ТК, полученном из 5-6 ЛТС по этой методике, составил от 220 х 109 до 370 х 109. В 2012 году нами была приобретена специализированная центрифуга «TACSI».

Центрифуга позволяет полностью автоматизировать этапы выделения ТК из пула ЛТС. Процессы сепарации, экстракции и фильтрации производятся непосредственно во время центрифугирования под контролем оптических датчиков и микропроцессора. Один цикл центрифугирования позволяет получить до 6 терапевтических доз ТК за 15 минут [7].

Использование технологии «TACSI» позволило получать терапевтическую дозу ТК из 4 ЛТС вместо 5–6. тромбоцитов в дозах составило от 270 х 109 до 530 х 109 (табл. 1).

Заключение

Выделение тромбоцитов из ЛТС является наиболее приемлемой альтернативой автоматическому тромбоцитаферезу. ТК, полученный из ЛТС, по своим качествам не уступает КТ, заготовленному аппаратным способом, и удовлетворяет требованиям для последующей инактивации на аппарате CERUS:

тромбоцитов от 250 до 350 х 109.

Остаточные лейкоциты в дозе менее 0,2 х 106.

Остаточные эритроциты менее 1 х 106.

Срок годности 5 суток.

Методика позволяет максимально реализовать донорский потенциал. Из каждой дозы крови мы получаем три компонента: эритроцитная взвесь с удалённым ЛТС, доза плазмы, обедненной лейкоцитами, и доза ЛТС, которая в дальнейшем может использоваться для получения тромбоцитов.

Поддерживая запас ЛТС, СПК имеет возможность оперативно приготовить ТК по экстренной заявке лечебного учреждения.

Применение контейнеров конфигурации «top and bottom», автоматических фракционаторов и центрифуги «TACSI» позволяет увеличить выход тромбоцитов из пулированных ЛТС в среднем на 30% .

Источник: //transfusion-web.ru/evolyutsiya-polucheniya-trombotsitnogo-kontsentrata-iz-lts-na-spk-no2-sangvis

Получение пулированного тромбоконцентрата из лейкотромбослоя, Служба крови

Получение тромбоцитов

Консервированная кровь подвергается первичному «жёсткому» центрифугированию на рефрижераторной центрифуге.

Для фракционирования крови с дальнейшим получением эритроцитной взвеси, плазмы и стандартной дозы ЛТС (45-55 мл) рекомендуется использование автоматического фракционатора.

4-6 ЛТС объединяются по групповой совместимости в один мешок с дальнейшим разбавлением раствором PAS.

  • Используется система для пулирования ЛТС с интегрированным лейкофильтром и газопроницаемым мешком для хранения ТК.
  • Для присоединения применяется устройство для стерильного соединения магистралей.
  • Вместо раствора PAS возможно разбавление пула плазмой одного из доноров ЛТС.

Получение ТК

Для отделения ТК от других клеточных элементов пула используется «мягкий» режим центрифугирования. Отделение и лейкофильтрация богатой тромбоцитами надосадочной жидкости осуществляются на автоматическом фракционаторе.

  • Возможно использование ручного плазмоэкстрактора, однако процесс фильтрации занимает больше времени. В этом случае значительно возрастает влияние человеческого фактора.
  • После удаления воздуха из мешка для хранения ТК осуществляется отбор пробы для исследования.

Хранение ТК

ТК хранится при температуре 22 ± 2°С и постоянном помешивании. Срок хранения не должен превышать 5 дней после сбора.

  • При необходимости полученный ТК можно подвергнуть инактивации с использованием системы INTERCEPT (Cerus, США).
  • Для определения бактериальной контаминации полученного ТК применяется аппарат BDS, Pall.

Принцип получения пулированного тромбоконцентрата

В фазе седиментации центробежная сила и фиксированное положение вкладышей с мешками приводят к вертикальной седиментации компонентов крови по направлению к стенкам вкладышей.

В ходе фазы сепарации пулированный тромбоконцентрат проходит через встроенный фильтр, предназначенный для удаления лейкоцитов, и попадает в мешок для хранения. Центробежная сила в фазе сепарации стабилизирует слои и улучшает качество сепарации.

Два оптических датчика обеспечивают четкое распознавание остаточного ЛТС, что дает максимальный выход тромбоцитов.

Фирма Terumo разработала новый фильтр IMUGARD® для тромбоцитов, используя полиуретановый материал с высокой биосовместимостью для получения в процессе лейкоредукции пулированного тромбоконцентрата.

Расположение фильтра обеспечивает поступление суспензии тромбоцитов в фильтр со стороны днища и прохождение через пластины фильтра в направлении, противоположном действующей центробежной силе.

Поступающие в фильтр эритроциты будут изначально накапливаться в его входной части.

Полиуретан как фильтрующий материал

Полиуретан – это полимер, в котором исходные молекулы соединены уретановыми связями путем реакции диизоцианатов и полиолов. Путем правильного выбора вариантов компонентов и их соотношений достигаются оптимальные физические, химические характеристики и характеристики биосовместимости.

Для создания лейкоцитарных фильтров в системах IMUGARD® III и IMUFLEX® фирма Terumo выбрала полиуретан с высочайшей биосовместимостью.

Исследование механизмов удаления лейкоцитов с применением полиурета на показывает, что большая часть лейкоцитов застревает механически в небольших порах или ямках материала.

Очень ограниченное взаимодействие клеток с материалом и отсутствие клеточной и протеиновой активации позволяют получать компоненты крови превосходного качества.

Заключение

Внедрение технологии получения тромбоцитов из ЛТС является перспективным направлением развития службы крови РФ.

Несмотря на распространение аферезного метода, приготовление тромбоцитов из ЛТС имеет ряд преимуществ. Высокое качество тромбоконцентрата.

Технология обеспечивает хороший выход и низкую активацию тромбоцитов, их морфологическую гомогенность, незначительную примесь лейкоцитов и эритроцитов, длительность циркуляции в кровотоке до 5-7 суток (при отсутствии повышенного потребления). Оперативность и простота приготовления.

Получив заявку, СПК имеет возможность приготовить лечебную дозу тромбоцитного концентрата из ЛТС, обследованных накануне, без затрат дополнительного времени и средств на вызов и обследование донора тромбоцитов.

Возможность заблаговременной заготовки тромбоцитов. Продление сроков хранения ТК до 5 суток позволяет СПК и ОПК поддерживать необходимый запас терапевтических доз ТК.

Доступность технологии для любой СПК. При фракционировании цельной крови на эритроциты и плазму достаточно выделять ЛТС, используя соответствующие режимы центрифугирования. Обязательной составляющей методики является расходный комплект для пулирования и устройство для стерильного соединения полимерных магистралей.

Возможность определения бактериальной контаминации и патогенной инактивации продукта.

Автоматизация процесса. По мере освоения технологии возможен переход к полной автоматизации (использование автоматических фракционаторов крови, расходных комплектов и аппарата TACSI компании Terumo).

Список использованной литературы

  1. Аграненко В.А. Выделение концентрата тромбоцитов лейкотромбоцитарного слоя донорской крови и их консервирование // Гематология и трансфузиология. 1991. № 3. – С. 29.
  2. Никитин И.К. Тезисы к XXIX конгрессу Международного общества переливания крови (ISBT). 2006. – www.transfusion.ru
  3. Жибурт Е.Б., Баранова О.В., Рейзман П.В., Кузьмин Н.С. Новое в трансфузиологии (XXVIII конгресс Международного общества переливания крови) / Центркрови Минздрава России. 2005. www.transfusion.ru
  4. Мерфи С. Тромбоциты из лейкотромбослоя (ВС): современные данные. Transfusion. – 2005. – www.transfusion.ru
  5. Орлов A.M., Трофимова С.А., Козлова М.В. Получение тромбоцитарного концентрата из лейкотромбослоя в ГУЗ СО «СПК №2 «Сангвис» (Научно-практическая конференция, посвященная 80-летнему юбилею ГУЗ СО «Станция переливания крови № 82 «Сангвис». – 2010. – С.ЗО.
  6. Стандарты качества в службе крови/ Под ред. Е.Б. Жибурта – М.: НПЦ – ИНТЕЛФОРУМ, 2005. – С.49-55.
  7. Постановление Правительства РФ от 26.01.2010 № 29 «Об утверждении технического регламента о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионноинфузионной терапии».
  8. Техническое руководство американской ассоциации банков крови (ААВВ)/ Пер. с англ.– Милан, Европейская школа трансфузионной медицины, 2000. – С. 220-224.
  9. Eriksson L, Hogman CF. Platelet concentrates in an additive solution prepared from pooled buffy coats. Vox Sang 1990:59:140-5.
  10. Kelley DL, Fegan RL, Ng AT, et al. High-yield platelet concentrates attainable by continuous quality improvement reduce platelet transfusion cost and donor exposure.Transfusion, 1997:37:482-6.
  11. Monraff G., Holme S. Concepts about current conditions for the preparation and storage of platelets. Transfus. Med. Rev., 1991; 5: 48-59.
  12. Schrezenmeier H., Seifried Et. E. Buffy-coat-derived pooled platelet concentrates and apfi eresis platelet concentrates: which product type should be preferred? Vox Sanguinis 2010; 99: 1-15.
  13. Murphy S: Platelets from pwled buffy coats: an update. Transfusion 2005; 45:634-639

Источник: //www.Advensum.com/catalog/encyclopedia_technologies/blood_service/1377/

БолезниНет
Добавить комментарий